生物化學(xué)檢測(cè)試劑盒采用微生物方法,在微孔板種定量檢測(cè)食品、藥品和飼料中的生物素總量(包括添加和原生生物素)。所有所需的試劑均包含在試劑盒中。本試劑盒共能提供96次檢測(cè)(包括標(biāo)準(zhǔn)品)。使用ELISA reader (610 - 630 nm 或者540 - 550 nm)進(jìn)行讀數(shù)。
生物化學(xué)檢測(cè)試劑盒的反應(yīng)原理:
對(duì)于延遲區(qū)來(lái)講,無(wú)規(guī)律可尋,對(duì)于指標(biāo)檢測(cè)沒(méi)有意義。
等速區(qū)對(duì)應(yīng)的指標(biāo)檢測(cè)方法是速率法。速率法又稱連續(xù)監(jiān)測(cè)法,是在測(cè)定酶活性或用酶法測(cè)定代謝產(chǎn)物時(shí),連續(xù)選取時(shí)間-吸光度曲線中線性期內(nèi)4個(gè)以上測(cè)光點(diǎn)作為讀數(shù)點(diǎn),并以單位時(shí)間吸光度變化值計(jì)算結(jié)果。線性期就是此期間內(nèi)各測(cè)光點(diǎn)之間的吸光度差值相等,此線性期對(duì)酶促反應(yīng)的底物來(lái)說(shuō)屬于零級(jí)反應(yīng)。其測(cè)光點(diǎn)一般設(shè)置在加入啟動(dòng)因子并孵育一段時(shí)間后開(kāi)始,持續(xù)1-3min,一般應(yīng)用于酶類項(xiàng)目,可以使用因數(shù)法來(lái)計(jì)算待測(cè)濃度。
過(guò)渡區(qū)對(duì)應(yīng)是固定時(shí)間法,是終點(diǎn)法中存在一種特殊情況,指在時(shí)間-吸光度曲線上選擇兩個(gè)讀數(shù)點(diǎn),此兩點(diǎn)既非反應(yīng)初始吸光度亦非平衡點(diǎn)吸光度,這兩點(diǎn)的吸光度差值用于結(jié)果計(jì)算。目的是解決某些化學(xué)反應(yīng)的非特異性問(wèn)題,提高準(zhǔn)確度。
平衡區(qū)對(duì)應(yīng)的是終點(diǎn)法,按測(cè)光點(diǎn)的個(gè)數(shù)分為:一點(diǎn)終點(diǎn)法、兩點(diǎn)終點(diǎn)法。
一點(diǎn)終點(diǎn)法是指在反應(yīng)到達(dá)平衡點(diǎn),即在時(shí)間-吸光度曲線上吸光度不再改變時(shí),選擇一個(gè)測(cè)光點(diǎn)計(jì)算待測(cè)物質(zhì)濃度。
兩點(diǎn)終點(diǎn)法常應(yīng)用于雙試劑的測(cè)定項(xiàng)目中,多數(shù)一試劑通常只含緩沖液等成分,它與樣本一般不起特異性反應(yīng);因此在二試劑加入前,選擇一個(gè)測(cè)光點(diǎn)作為一讀數(shù)點(diǎn),此時(shí)的吸光度相當(dāng)于樣品空白。加入二試劑后待測(cè)物質(zhì)起反應(yīng),并經(jīng)過(guò)一定時(shí)間反應(yīng)到達(dá)平衡點(diǎn),此時(shí)選擇二個(gè)讀數(shù)點(diǎn),兩讀數(shù)點(diǎn)吸光度之差用于計(jì)算待測(cè)物質(zhì)濃度。
兩點(diǎn)法能有效消除樣品溶血、黃疸、脂濁等造成的光吸收干擾。如:酶法測(cè)定葡萄糖、總膽固醇、甘油三酯、尿酸、肌酐,以及化學(xué)法測(cè)定總蛋白、總膽紅素、直接膽紅素、鈣、磷、鎂、鐵等;并且都能在加入二試劑后的2-5 min內(nèi)達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)。